検査と技術13巻5号

1985年05月発行

検査法の基礎理論　なぜこうなるの？

4-ニトロフェノールのpK_aと吸収スペクトル

著者： 山舘周恒¹

所属機関： ¹日本大学板橋病院臨床検査部

ページ範囲：P.423 - P.427

　4-ニトロフェノール（4-nitrophenol）の最大吸収波長（λ_max）は318 nmであるが，解離して4-ニトロフェノキシドイオン（4-nitrophenoxide ion）になることによってλ_maxは401nmに移動する．日常，臨床化学分析において4-ニトロフェノール誘導体を基質として酵素活性を測定する際には，この吸収スペクトルの移動する現象を利用して基質量の変化を知る．アルカリホスファターゼ活性やα-アミラーゼ活性の測定時の基質である4-ニトロフェニルリン酸（4-nitrophenylphosphate）や4-ニトロフェニルマルトオリゴサッカライド（4-nitrophenylmaltooligosaccharide）も318nm付近にλ_maxがあるが，これに酵素が作用して4-ニトロフェノールが遊離し，この4-ニトロフェノールが図1のように4-ニトロフェノキシドイオンに解離した状態で存在することによって，405nm付近の波長で測定が可能となる．
　この解離する割合は，その物質のPK_aと反応系のpHによって決まる．4-ニトロフェノールのPK_aは約7であるから，アルカリホスファターゼ活性の測定時のようにpH10以上の反応系では，ほぼ100％解離しているものとみなすことができる．しかし，α-アミラーゼ活性測定法として近年登場した4-ニトロフェニルマルトオリゴサッカライドを基質とした方法1）では，アミラーゼの至適pHを考慮してpH7付近で反応系を組むため，4-ニトロフェノールの解離する割合が問題となる．