検査と技術19巻9号

1991年08月発行

検査ファイル

項目●マイクロプレートハイブリダイゼーション法

著者： 江崎孝行¹ 三宅正美²

所属機関： ¹岐阜大学医学部微生物学講座 ²岐阜医療技術短期大学

ページ範囲：P.770 - P.771

　マイクロプレートハイプリダイゼーション（microplate hybridization）法は，2つの菌株間の遺伝学的類似度を測定するために開発された定量的DNA-DNAハイブリダイゼーション法であるが，この方法はDNAの標識にアイソトープを使わないため，一般の細菌検査室で菌種の同定に応用できる．同定に利用する場合は，図に示した手順で実験を行う．市販のキットを使う場合は，DNAを固定したプレートはすでに作製してあるのでこの操作は必要なくなる．
　まず，分離された菌株のDNAを抽出しフォトビオチンで標識する．同定したい菌株と類似した菌種のDNAが固定された96穴のプレートに標識DNAを分注し，ハイブリダイゼーションを行う．90分後，未反応の標識DNAを洗い流した後，streptavidin-conjugated enzymeを加え，ビチオンとストレプトアビジンを結合させる．洗浄後酵素の基質を加え，二本鎖になったDNA量を定量し，標識菌と基準株のDNAの相同性を算出し最も近い基準株を探す．菌液を作製してから同定まで約3時間しかかからず，細菌の迅速同定が可能になった^1）．以下この方法を解説する．