検査と技術25巻7号

1997年06月発行

輸血検査メモ

TMA法

著者： 前田平生¹

所属機関： ¹埼玉医科大学総合医療センター輸血部

ページ範囲：P.194 - P.194

　核酸増幅法の1つであるTMA（transcription mediated amplification）法は，1細胞に1個のDNAの遺伝子よりも数千コピー存在するリボソームRNAの遺伝子をターゲットにすることにより，感度を必要とする感染症などの検出系において開発，実用化されたRNA増幅法である．現在では，このTMA法は，DNA依存性DNA合成酵素活性を持つ逆転写酵素とRNAポリメラーゼを利用することにより，DNAをターゲットとしたRNA増幅法として改良が加えられ，HLAクラスⅡ遺伝子のタイピングに応用されている．白血球より抽出したDNAは相補的水素結合で二本鎖を形成しているが，熱変性により一本鎖DNAにする．次に温度を下げ，プロモータープライマーとアニーリング後，DNA依存性DNA合成酵素活性を持つ逆転写酵素を加え，プライマー伸長反応による二本鎖DNAを合成する．再び熱変性を行い，温度を下げ，第2プライマーのアニーリング後，さらに逆転写酵素とRNAポリメラーゼにより第1プライマーの配列が導入された二本鎖DNAが産生され，この二本鎖DNAを鋳型にしてRNAポリメラーゼが働き，最終産物として相補的な一本鎖RNAが多量に合成される．