検査と技術37巻4号

2009年04月発行

Laboratory Practice 〈遺伝子〉

LAMP法

著者： 保坂憲光¹ 納富継宣¹

所属機関： ¹栄研化学株式会社生物化学研究所第二部1チーム

ページ範囲：P.372 - P.376

はじめに

　LAMP(loop-mediated isothermal amplification)法^1）は遺伝子増幅法の一つである．LAMP法は遺伝子増幅時に6領域を認識するプライマーを用いているため特異性が非常に高いこと，鎖置換型DNAポリメラーゼを用いた増幅反応が等温で連続して進むこと，その増幅産物量が多いため増幅の有無を容易に確認することが可能である点が大きな特徴である．また，RNAの増幅はDNA増幅試薬に逆転写酵素を添加しておけば，ワンステップで行うことも可能である^2）．

　本稿では，LAMP法を実験に用いるうえで問題になる“反応を行う際の注意点”を，DNA増幅試薬キットとプライマーセットを例として示す．続いて各自が目的とする標的遺伝子を検出するために必要な，“プライマーの設計”，“増幅反応条件の決め方”，“検出結果の判定”について述べる．

参考文献

1) Notomi T, Okayama H, Masubuchi H, et al:Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic Acids Res　28：E63，2000

2) Parida M, Posadas G, Inoue S, et al:Real-Time Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification for Rapid Detection of West Nile Virus. J Clin Microbiol　42：257-263，2004

3) Nagamine K, Hase T, Notomi T:Accelerated reaction by loop-mediated isothermal amplification using loop primers. Mol Cell Probes　16：223-229，2002

FL-labeled probe or primer. Nucleic Acids Res　29：E34，2001

5) Mori Y, Nagamine K, Tomita N, et al:Detection of Loop-Mediated Isothermal Amplification Reaction by Turbidity Derived from Magnesium Pyrophosphate Formation. Biochem Biophys Res Commun　289：150-154，2001

6) Iwasaki M, Yonekawa T, Otsuka K, et al:Validation of the Loop-Mediated Isothermal Amplification Method for Single Nucleotide Polymorphism Genotyping with Whole Blood. Genome Lett　2：119-126，2003