検査と技術38巻3号

2010年03月発行

技術講座 遺伝子

各種遺伝子検査法の特徴―核酸増幅法を中心に

著者： 増川敦子¹ 松下弘道² 宮地勇人²

所属機関： ¹東海大学医学部付属病院臨床検査科 ²東海大学医学部基盤診療系臨床検査学

ページ範囲：P.195 - P.202

新しい知見

　遺伝子検査の新しいステージが展開されている．検出可能範囲や目的によって検出系を使い分けることなく，エキソン単位～染色体まで広領域を解析できるMLPA(multiplex ligation-dependent probe amplification)法が開発された．MLPA法はポリメラーゼ連鎖反応(polymerase chain reaction，PCR)増幅のための特異的プローブにユニーバサルプライマー(共通配列)を結合させている．特異的プローブ設定で欠失，挿入の解析ができ，またプローブの3′/5′部位をSNP(single nucleotide polymorphism)部位やメチル化部位に設定することでSNPタイピングやメチル化を解析することができる．検査の簡素化としてQP(quenching probe)法を利用した分析機器(i-densy^TM)が開発された．QP法は標的SNP領域をPCR増幅し，相補的配列のQProbe(蛍光標識したシトシン塩基を末端にもち解離すると発光)と結合しQProbeの解離温度の異なりで検出する．検体は，前処理・増幅・検出が一体化した試薬キットに分注後，専用機器にセットするだけと簡素化されている．主に投薬前診断を目的とした薬物代謝酵素SNPs検出用試薬が市販されている．

参考文献

1) 横田浩充：Real-time PCR法(TaqMan PCR，Light cycler)による遺伝子定量．臨床病理レビュー　128：180-189，2004

2) 末広寛，濱中裕一郎，日野田裕治：制限酵素断片長多型(restriction enzyme fragment length polymorphism，RFLP)，マイクロサテライト(microsatellite)解析法．臨床病理レビュー　128：200-208，2004

3) 加藤郁之進(監訳)：ラボマニュアルPCR―研究と臨床診断への応用，第1版．宝酒造バイオ研究所，pp147-154，1996

4) 川村眞智子，林健志：臨床DNA診断法．古庄敏行，井村裕夫(監・編)：PCR-SSCP，第1版．金原出版，pp90-97，1995

5) 大藤道衛：意外に知らない，いまさら聞けないバイオ実験超基本Q＆A．羊土社，2004

6) 加藤郁之進(監訳)：ラボマニュアルPCR―研究と臨床診断への応用，第1版．宝酒造バイオ研究所，pp161-166，1996

7) 福地邦夫：PCRと塩基配列決定．臨床検査　51：1299-1304，2007

8) 糸賀栄，野村文夫：Direct Sequence法(PCR-SSCP，SNPsを含む)．臨床病理レビュー　128：209-220，2004

9) Baxter EJ, Scott LM, Campbell PJ, et al:Acquired mutation of the tyrosine kinase JAK2 in human myeloproliferative disorders. Lancet　365：1054-1061，2005

10) Little MC, Andrews J, Moore R, et al:Strand Displacement amplification and homogeneous real-time detection incorporated in a second-generation DNA probe system, BDProbeTecET. Clin Chem　45：777-784，1990

11) ベクトン・デイッキンソンホームページ　(http://www.bdj.co.jp/micro/support/sda/1f3pro000002f1o0.html)

12) 納富継宣：LAMP法が拓く新しい遺伝子検査．日本臨床　65：957-961，2007

13) 栄研化学ホームページ(http://loopamp.eiken.co.jp/lamp/principle.html)

14) 嶌田雅光，日野文嗣：ICAN法による高感度等温核酸増幅．医学のあゆみ　206：475-478，2003

15) タカラバイオホームページ(http://www.takara-bio.co.jp/)

16) 大楠清文，江崎孝行：新しい遺伝子増幅法―NASBA法．Medical Technology　33：894-896，2005

17) カイノスホームページ(http://www.kainos.co.jp/)

18) Kwoh DY, Davis GR, Whitfield KM, et al:Transcription-based amplification system and detection of amplified human immunodeficiency virus type 1 with a bead-based sandwich hybridization format. Proc Natl Acad Sci USA　86：1173-1177，1989

19) Gen-Probe社ホームページ　(http://www.gen-probe.com/science/core_technologies.aspx)

20) 保川清：TRC反応によるRNAの増幅とリアルタイム検出．医学のあゆみ　206：479-483，2003

21) 東ソー社ホームページ(http://www.tosoh.co.jp/science/trc/trc.html)

22) 矢嶋隆一：リガーゼ・チェイン・リアクション(LCR)．臨床病理　45：41-46，1997