検査と技術45巻4号

2017年04月発行

技術講座 遺伝子・染色体検査

—step up編—高解像度融解曲線分析（HRM）法を用いた遺伝子変異解析のポイントと注意点

著者： 宮原悠太¹ 岡山直子¹

所属機関： ¹山口大学医学部附属病院検査部

ページ範囲：P.456 - P.461

Point

●融解曲線分析とは，二本鎖DNAに結合する蛍光色素を用いて，低温から高温に変化する過程で，二本鎖DNAが熱変性により一本鎖DNAに分離する現象を蛍光強度で捉える手法で，SNPsや欠失/挿入などを解析することが可能である．

●高解像度融解曲線分析（HRM）法は，高い精度と汎用性をもちながら，その他の遺伝子解析技術に比べ複雑な手技を必要とせず，比較的安価であるなどの特徴をもつことから，有用性が高い手法である．

●解析結果は，PCR産物の長さやSNPsの種類，変異の位置などの条件に左右されることが多いため，プライマー作成時に注意が必要である．

参考文献

1）Borràs E, Jurado I, Hernan I, et al : Clinical pharmacogenomic testing of KRAS, BRAF and EGFR mutations by high resolution melting analysis and ultra-deep pyrosequencing. BMC Cancer　11：406，2011

2）Pichler M, Balic M, Stadelmeyer E, et al : Evaluation of high-resolution melting analysis as a diagnostic tool to detect the BRAF V600E mutation in colorectal tumors. J Mol Diagn　11：140-147，2009

3）宮原悠太，岡山直子，鉄田有希乃，他：リアルタイムPCR装置ViiA7を用いたHRM法によるKRAS，BRAF変異解析．日臨検自動化会誌　38：578，2013