検査と技術45巻7号

2017年07月発行

臨床検査のピットフォール

脱灰液が核酸品質に与える影響に注意

著者： 吹谷美佳¹ 丸川活司¹ 安孫子光春¹

所属機関： ¹北海道大学病院病理部

ページ範囲：P.774 - P.777

はじめに

　組織標本を作製する過程において，組織検体に骨，歯，石灰化病変のような硬組織が含まれている場合，そのままでは切り出しやミクロトームでの薄切は非常に困難である．そこで，酸などにより組織内の炭酸カルシウムをカルシウム塩に分解し，あらかじめ切り出しや薄切が可能な硬さまで変化させておく必要がある．このように石灰化組織から石灰を除去する操作を脱灰といい，脱灰操作に求められる条件としては，組織検体の膨化・収縮・溶解などの変性が起こらず，染色性に影響がないことが挙げられる．

　現在，病理検査室で行われている脱灰法には，無機酸である塩酸や硝酸，有機酸であるギ酸などを単独で用いる方法と，プランク・リュクロ（Plank-Rychlo）液のように有機酸と無機酸を混合したものを用いる方法の他に，EDTA（ethylenediaminetetraacetic acid）やクエン酸などのキレート剤を用いる方法があるが，脱灰操作を用いた場合の欠点として，HE（hematoxylin-eosin）染色でのヘマトキシリンの染色性の低下や，免疫組織化学染色での抗原性失活による発色感度の減弱などが報告されている^1，2）．しかし，脱灰操作による核酸品質への影響に関する報告^3〜5）は少ないことから，薄切時に利用される表面脱灰法を用い，これらが核酸品質に与える影響について考えてみたい．

参考文献

1）鈴木恒道，渡辺恒彦：第3章　脱灰．日本病理学会（編）：病理技術マニュアル3　病理組織標本作製技術　上．医歯薬出版，pp51-59，1981

2）宇月美和，澤井高志：硬組織における免疫組織化学．病理と臨　18：57-62，2000

3）一般社団法人日本病理学会：ゲノム研究用病理組織検体取扱い規程，2016

4）Salmon CR, Silvério KG, Giorgetti AP, et al : Gene expression analysis in microdissected samples from decalcified tissues. Diagn Mol Pathol　21：120-126，2012

5）Belluoccio D, Rowley L, Little CB, et al : Maintaining mRNA integrity during decalcification of mineralized tissues. PLoS One　8：e58154，2013

6）van Dongen JJ, Langerak AW, Brüggemann M, et al : Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations : report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia　17：2257-2317，2003

7）Imbeaud S, Graudens E, Boulanger V, et al : Towards standardization of RNA quality assessment using user-independent classifiers of microcapillary electrophoresis traces. Nucleic Acids Res　33：e56，2005

8）Schroeder A, Mueller O, Stocker S, et al : The RIN : an RNA integrity number for assigning integrity values to RNA measurements. BMC Mol Biol　7：3，2006

9）Kashofer K, Viertler C, Pichler M, et al : Quality control of RNA preservation and extraction from paraffin-embedded tissue : implications for RT-PCR and microarray analysis. PLoS One　8：e70714，2013