臨床眼科77巻5号

2023年05月発行

特集 第76回日本臨床眼科学会講演集［3］ 原著

ヒト血清点眼におけるリゾチーム遺伝子発現の定量

著者： 明尾潔¹² 明尾庸子¹² 明尾慶一郎¹ 飛田恵子¹ 加藤帝子¹ 大森美香¹

所属機関： ¹あけお眼科医院 ²あけお眼科研究所

ページ範囲：P.655 - P.661

要約　目的：細菌の細胞壁多糖類を加水分解して，溶菌作用を有する酵素であるリゾチーム遺伝子（Lyz）の発現量についてリアルタイムpolymerase chain reaction（PCR）によりヒト血清点眼において定量を試みた結果の報告。

対象と方法：定量のためLyzのcDNAは増殖された大腸菌のプラスミドから10×10⁷のコピーを得た。希釈倍率は1，4，16，256，1,024倍とした。ヒト血清は原液，4倍希釈，レボフロキサシン点眼液（Le）を添加したものからRNAを抽出し，逆転写を行った。微量分光光度計により，RNA，DNA量を測り，cDNA，プライマー，MyGo-greenを混合し，Lyz発現をMyGoリアルタイムPCRにより定量的に解析した。

結果：LyzのcDNAコピー数（q）に対する検量線はCq（増殖曲線がthreshold lineと交差するときのcycle数）＝−2.62 log10（q）＋37.27，r²＝0.999であった。また，Tm値（二本鎖DNAの50％が一本鎖に解離するときの温度）はコントロールとヒト血清との間で有意差はなく，ヒト血清の原液は420.4±172.6コピー/mLという量であった。RNAのみ原液は4倍希釈より有意に多く，DNA，Lyz発現量では原液，4倍希釈，Leを添加したものの間で有意差を認めなかった。

結論：Lyz発現量はヒト血清点眼と原液との間で有意差はなく，定量化の応用範囲を広げられる可能性があると思われた。

参考文献

1）井本泰治：リゾチームの研究を楽しんで42年．薬学雑誌123：377-386，2003

2）Valadi H, Ekström K, Bossios A et al：Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells. Nat Cell Biol 9：654-659, 2007

3）Yoshimura K, Toibana A, Nakahama K：Human lysozyme：sequencing of a cDNA, and expression and secretion by Saccharomyces cerevisiae. Biochem Biophys Res Commun 150：794-801, 1988

4）茶谷江美・山地亮一・乾　博・他：低酸素下でのグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼの細胞情報伝達への寄与：第397回ビタミンB研究委員会．ビタミン78：455-456，2004

5）Akeo K, Funayama T, Hamada N et al：The effects of ultraviolet irradiation and hypoxia on expression of glutathione peroxidase and glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase in the cultured retinal pigment epithelium. Tiss Cult Res Commun 26：149-157, 2007

6）Akeo K, Hamada N, Funayama T et al：Effects of ion beam irradiation on the expression of glutathione peroxidase in cultured human retinal vascular endothelial cells exposed to L-dopa. Tiss Cult Res Commun 32：195-202, 2013

7）明尾　潔・舟山知夫・明尾庸子・他：Ion Beam照射と低濃度Verteporfin投与の培養網膜血管内皮Glutathione Peroxidase発現．日眼会誌126（臨増）：237，2022

8）明尾　潔・舟山知夫・明尾庸子・他：ヒト培養網膜血管内皮のbcl2発現に与える低濃度ベルテポルフィンとイオンビームの影響．日眼会誌125（臨増）：275，2021

9）Stamp GW, Poulsom R, Chung LP et al：Lysozyme gene expression in inflammatory bowel disease. Gastroenterology 103：532-538, 1992

10）Aho HJ, Saari KM, Kallajoki M et al：Synthesis of group II phospholipase A2 and lysozyme in lacrimal glands. Invest Ophthalmol Vis Sci 37：1826-1832, 1996

11）Tomita T, Kato M, Mishima T et al：Extracellular mRNA transported to the nucleus exerts translation-independent function. Nat Commun 12：3655, 2021