生体の科学31巻2号

1980年04月発行

実験講座

SDS-ポリアクリルアミド電気泳動における活性染色

著者： 上里忠良¹

所属機関： ¹浜松医科大学生化学第二講座

ページ範囲：P.149 - P.153

　はじめに
　SDS-ポリアクリルアミド電気泳動（SDS-PAGE）はタンパク質の分子量測定の簡便法として生化学に広く応用されているが，いろいろな人の方法がこれまで報告されている。その分子量測定の原理については他の総説^1,2）を参照されたい。酵素およびタンパクの機能の活性染色にも，種々の方法があると思うが，通常組織学的染色方法がそのまま，または多少改良されて用いられている。SDS-PAGEで，酵素，タンパク等の機能および活性が損われないことが必要条件である。一手法として泳動後ゲルを1〜2mm間隔にスライスし，1枚ずつ試験管内で活性を測定するという方法もあるが，ゲル上で直接活性バンドが得られるのはきわめて便宜なことが多い。組織化学的に用いられている活性染色法には数多くあり他の参考書^3,4）に詳しく記載されている。SDS-PAGEに応用される活性染色法には，表1に示したように例えば，シュクラーゼ等のようなGODと色素をカップルさせた方法^5）や，ATPase等のようなリン酸Ca^＋＋の沈殿法^3,4）や，ALPase等の人工基質を用いて螢光で見る方法，ジアゾ色素をカップルさせて発色させる方法^3,4）などがある。その他に，広い意味で，糖タンパク等を調べるPAS染色や，レクチン-ペルオキシダーゼ法^6）や目的とする酵素の抗体を用いた酵素抗体法^4）などがSDS-PAGEにも応用されてきている。