生体の科学38巻1号

1987年02月発行

実験講座

Ca-EGTA緩衝液の作製とその問題点

著者： 老木成稔¹ 岡田泰伸¹

所属機関： ¹京都大学医学部生理学教室

ページ範囲：P.79 - P.83

文献概要

　細胞内Ca^2＋は10⁻⁶M以下のレベルにおけるわずかな変化によって，多くの細胞機能調節に関わっている^1）。細胞内灌流法やパッチ電極法およびpermeabilized cellmethodなどの実験技術の著しい進歩により，通常の小細胞においてもin vitroで直接細胞内を取り扱うことが可能となった。そのためには実験溶液の遊離Ca^2＋濃度を10⁻⁶M以下の領域でコントロールする必要があり，キレート剤を用いたCa緩衝液の使用が不可欠である。Caに対して親和性が高く，Mg^2＋による干渉の少ないEGTAがもっともよく使用されている。スイスのSchwarzenbach一門によって物理化学的性質が詳らかにされたこのEGTAは，江橋らによって最初に系統的な生物学的実験に供された。EDTAやEGTAの使用は，筋肉の収縮機構の研究における輝かしい成果^2）の不可欠の契機となった。
　Ca-EGTA緩衝液中の遊離Ca^2＋濃度の計算には次の二つのやり方がある。それぞれの実験条件での「みかけの結合定数」（後述）を測定し，それを用いて計算する^3,4）。あるいは，与えられた「絶対結合定数」（後述）のセット値を選択して（コンピュータを用いて）計算する^5-7）。