生体の科学38巻5号

1987年10月発行

特集 細胞生物学における免疫実験マニュアル

抗体の作製と吟味

エメチン/アクチノマイシンD法を用いたハイブリドーマ取得法

著者： 樋口昌宏¹

所属機関： ¹東京大学薬学部生体異物免疫化学教室

ページ範囲：P.382 - P.383

文献概要

　Köhler Milsteinらによって開発された細胞融合技術^1）はモノクローナル抗体取得という大きな成果をもたらしたが，その後その応用範囲はB細胞のみにとどまらず，T細胞，マクロファージその他多くの細胞へ応用されてきた。T細胞に関しても従来の方法であるhypoxantineguanine phosphoribosyl transferase欠損株またはthymidine kinase欠損株とTリンパ球とを融合させHAT培地で選択するという方法が一般的にとられるが，この際チミジンがT細胞系の増殖を抑制するため融合効率がその結果として低かった。
　われわれはこの問題点について改良したemetine-actinomycin D法という新しい融合方法を確立した^2）。タンパク質の不可逆的合成阻害剤であるemetineはリボソームがmRNA上を移動することを阻害し，またポリゾームが単独ポリゾームに分離する過程を阻害することが知られている^3）。一方RNAの不可逆的合成阻害剤であるactinomycin Dは低濃度では核小体におけるリボソームRNAの合成を阻害することが知られている^4）。そこで両者を併用した場合，細胞内の使用可能なリボソーム量が減少し，かつ新たな合成を抑制するため，この処理を受けた親株は数日後に死滅する。