臨床検査50巻2号

2006年02月発行

シリーズ最新医学講座・Ⅰ 法医学の遺伝子検査・2

法医学試料の問題点と抽出・精製法

著者： 赤根敦¹

所属機関： ¹関西医科大学法医学講座

ページ範囲：P.225 - P.230

法医学試料の性状
　法医学試料とは，事件・事故現場で発見される血痕，精液斑などの斑痕試料や，犯罪死体，変死体から得られる試料をさし，個人識別などの目的でこれらからDNAを抽出し，分析する．斑痕試料は屋内，屋外などの不衛生な汚染された環境で，場合によっては長期間放置されているし，死体も発見までに時間がかかれば腐敗が進行する．その結果，試料採取時にすでに試料内のDNAの分解が進行していたり，体外，体内の物質に汚染されていたりして，DNA検査に悪影響を及ぼすことがしばしばある．

　DNAは基本的にフェノール・クロロフォルム法で抽出する．試料が新鮮血の場合は白血球沈渣を，組織片の場合は事前に裁断し，血痕などの斑痕試料は切断片をそのまま用いる．これらの試料を蛋白分解酵素と界面活性剤の入ったバッファーで蛋白質，脂質を消化する．次にフェノール・クロロフォルム溶液を等量添加して，混和・遠心分離して分解した蛋白質，脂質をフェノール層に移す．水層のみをとってこの操作を繰り返し，最後に水層を2倍量の70%エタノールと混和すればDNAが析出し，遠心分離して回収することができる．通常はこの方法でDNA以外の不純物は除去されるが，法医学試料ではDNAとともに抽出される不純物が少なくないし，分解しているDNAは除去されず，これらがPCR増幅を阻害する．このような阻害因子の種類とその精製法について説明する．

参考文献

１) 赤根敦，綿引利充，時安太久磨，他：加熱により誘導されるアポトーシスの検討―加熱温度とDNA断片化の相関．DNA多型　4：199-203, 1996

２) Akane A, Matsubara K, Nakamura H, et al：Identification of heme compound copurified with DNA from bloodstains, a major inhibitor for PCR amplification. J Forensic Sci　39：362-372, 1994

３) 赤根敦，吉村澄孝，沖井裕，他：PCR阻害物質メトヘムアルブミンの生成とその性状．DNA多型　4：210-218, 1996

４) Akane A：PCR inhibitor in bloodstain extracts. Adavances in Legal Medicine 3(Wakasugi C, ed)Yoyodo, pp308-312, 1997

５) Akane A, Shiono H, Matsubara K, et al：Purification of forensic specimens for the PCR analysis. J Forensic Sci　38：691-701, 1993

６) Akane A, Matsubara K, Nakamura H, et al：Purification of highly degraded DNA by gel filtration. BioTechniques　16：235-237, 1994

７) Akane A：Hydrogen peroxide decomposes the heme compound in forensic specimens and improves the efficiency of PCR. BioTechniques　21：392-394, 1996