臨床検査65巻11号

2021年11月発行

今月の特集1 今さら？ 今だから学ぶPCR

PCRの基本原理と実際

著者： 髙崎智彦¹

所属機関： ¹神奈川県衛生研究所

ページ範囲：P.1142 - P.1147

Point

●RT-PCRの“RT”は逆転写反応のことであり，リアルタイムPCRのリアルタイムの略ではない．RNAをPCRで増幅するには逆転写反応が必須である．

●グラム陰性桿菌好気好熱性の細菌Thermus aquaticus由来の酵素であるTaqポリメラーゼがPCR技術の確立に寄与した．

●リアルタイムPCR法は，PCR産物の増幅量をリアルタイムでモニターし解析する方法で，迅速性と定量性に優れている．インターカレーター法と蛍光標識プローブ法の2種類がある．

●感度の高い遺伝子検出法であっても，結果には判定保留域があることと，特にウイルスの場合，必ずしもウイルス遺伝子陽性＝感染性粒子でないことに留意する必要がある．

参考文献

1）Mullis KB, Faloona FA：Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction. Methods Enzymol　155：335-350，1987

2）Saiki RK, Scharf S, Faloona F, et al：Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science　230：1350-1354，1985

3）Saiki RK, Gelfand DH, Stoffel S, et al：Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase. Science　239：487-491，1988

4）Brock TD, Freeze H：Thermus aquaticus gen. n. and sp. n., a nonsporulating extreme thermophile. J Bacteriol　98：289-297，1969

5）Myers TW, Gelfand DH：Reverse transcription and DNA amplification by a Thermus thermophilus DNA polymerase. Biochemistry　30：7661-7666，1991

6）国立感染症研究所：デングウイルス感染症診断マニュアル（https://www.niid.go.jp/niid/images/vir1/PDF/denguelabomanual.pdf）（最終アクセス：2021年5月31日）

7）国立感染症研究所：病原体検出マニュアル　麻疹　第3.4版，2017（https://www.niid.go.jp/niid/images/lab-manual/measles.v3-4.2017Mar.pdf）（最終アクセス：2021年5月31日）